免疫荧光染色指南：抗体选择全攻略

免疫荧光染色技术基于抗原抗体反应的高度特异性。通过将不影响抗原抗体活性的荧光色素标记在抗体或抗原上，当被标记的抗体与对应的抗原特异性结合时，可以在荧光显微镜下观察到一种特异性的荧光反应，从而确定抗原的存在、分布和定位。今天草莓主要跟大家分享关于免疫荧光染色抗体该如何选择，希望能够帮助到大家

免疫荧光染色一抗的选择：

①根据样本选择一抗：

一抗的种属来源应尽量与检测样本的种属不同，以避免二抗与样本内源性免疫球蛋白产生交叉反应。如如果检测的是小鼠样本，那么一抗应避免选择小鼠或大鼠源，而应选择如兔源等其他种属的一抗。这样，在选择二抗时就可以选择抗兔的二抗，从而避免交叉反应的发生。

②确认抗体检测指标就是你要检测的目的蛋白

在免疫荧光染色或其他基于抗体的实验中，由于同一个蛋白可能拥有多个不同的命名或同义词，因此，我们需要确保所选抗体的检测目标与我们研究目标蛋白完全一致是至关重要的。为了避免因命名混淆而导致的实验误差，一个简便且有效的方法是通过比对UniProt ID来确认抗体的特异性。同时选择的抗体说明书需要明确指出能够进行免疫荧光实验，即IF

④什么是预测可以检测的种属？

在抗体选择过程中，有时会在产品说明书上看到“预测会与哪些种属反应”（Predicted to work with）这样的表述。这通常是厂家基于目标蛋白在不同物种间的同源性进行的一种预测，意味着抗体可能能够识别并结合这些预测种属中的相似蛋白。由于这种预测没有实验验证，厂家通常不会为这类抗体的性能提供质保。

免疫荧光染色二抗的选择：

①二抗的种属来源需要与一抗相对应

如果一抗是兔源性的，那么应该选择识别兔IgG的二抗，即anti-rabbit IgG。

③荧光基团的选择：

如果实验需要进行多重检测，即同时检测多个靶标，那么需要选择光谱不重叠且稳定明亮的荧光基团。这样可以确保每个靶标都能被独立且清晰地检测到。免疫荧光三标可以选择 488，555，647

举例分析：

免疫荧光三标选择抗体：

①三种一抗种属来源不同，比如分别选择来源于pig,mouse,rabbit

②三种二抗的种属来源最好是相同的，并且不同于任何一种一抗，这里就可以选择Goat-anti -pig 488,Goat-anti-mouse-555,Goat-anti-rabbit-647

其他的选择要求自行判断，免疫荧光多重染色选择抗体可能比较难，可以考虑使用TSA技术。